1.冲山茶苷在制备预防和/或修复皮肤光损伤产品中的应用。
2.根据权利要求1所述的冲山茶苷在制备预防和/或修复皮肤光损伤产品中的应用，其特征在于，所述冲山茶苷的有效浓度为0.05μg/mL-5μg/mL。
3.根据权利要求1所述的冲山茶苷在制备预防和/或修复皮肤光损伤产品中的应用，其特征在于，所述皮肤光损伤为紫外光照射导致的皮肤光损伤。
4.根据权利要求3所述的冲山茶苷在制备预防和/或修复皮肤光损伤产品中的应用，其特征在于，所述皮肤光损伤包括晒黑、晒伤、光老化、光毒性反应、光敏反应或皮肤肿瘤中的一种或多种。
5.一种预防和/或修复皮肤光损伤的外用制剂，其特征在于，所述预防和/或修复皮肤光损伤的外用制剂的有效成分为冲山茶苷。
6.根据权利要求5所述的预防和/或修复皮肤光损伤的外用制剂，其特征在于，以质量百分比计，所述外用制剂中所述冲山茶苷的含量为0.1％-5％。
7.如权利要求5所述的预防和/或修复皮肤光损伤的外用制剂，其特征在于，所述外用制剂包括化妆品、医学美容产品或药品。
8.如权利要求7所述的预防和/或修复皮肤光损伤的外用制剂，其特征在于，所述化妆品包括原液、乳液、精华素、精华霜、爽肤水、调理水、面霜、面膜、隔离霜、眼霜、喷雾、防晒霜、粉底或身体乳。
9.如权利要求7所述的预防和/或修复皮肤光损伤的外用制剂，其特征在于，所述医学美容产品包括原液、敷料、冷敷贴、凝胶、海绵、膜、水光针、植入剂、乳、霜或膏。

技术领域
[0001]本发明涉及皮肤医学领域，特别是涉及冲山茶苷在预防和/或修复皮肤光损伤中的应用。
背景技术
[0002]人体皮肤是我们身体最广阔的器官，平均面积可达1.5至2平方米，其重量占据整个体重的5％至15％。皮肤扮演着至关重要的屏障角色，它保护着我们体内的组织和器官，免受外界病毒和物理化学伤害的侵袭。此外，皮肤还具有调节体温、感知温度和压力，以及排汗等功能。然而，在日常生活中，我们的皮肤难免要接受阳光的照射。紫外线是太阳光中的主要成分，特别是波长为320至400纳米的长波紫外线(UVA)能够穿透表皮，引发黑色素的光氧化反应，导致皮肤晒黑。而波长为280至320纳米的中波紫外线(UVB)则可能引发日光性皮炎、免疫抑制和光致癌作用。过量的紫外线照射不仅会引起皮肤急性反应，如红斑或焦痂、炎症和水疱等，还可能导致皮肤老化、DNA损伤和恶性黑色素瘤等慢性影响。因此，保护皮肤免受紫外线伤害，对于维护整体身体健康至关重要。
[0003]冲山茶苷是从金花茶中发现的一种天然成分，即3,4-O,O-次甲基鞣花酸-4’-葡萄糖苷，其以鞣花酸为基本母核，分子式为C21H16O13，分子量为476.0591。冲山茶苷提取物是以金花茶叶为原料，经过水提醇沉的方法制得的粗提物，其中冲山茶苷的含量约为10％。专利CN110922438A公开了从一种从金花茶中制备鞣花酸衍生物冲山茶苷的方法；CN110907387A公开了冲山茶苷含量的近红外快速检测方法；CN113116914A公开了桂皮醛和冲山茶苷协同抗肿瘤的应用；以及CN116850200A公开了冲山茶苷在制备治疗变应性接触性皮炎的药物中的应用。另外，目前对于冲山茶苷的药理活性报道有其抑制非小细胞肺癌及结肠癌的活性[Cheng等.Acta Pharmacol Sin.2022；43(4):1046-1058.]、抗脱粒效果[Onodera K等.Biosci Biotechnol Biochem.2010；74(12):2532-2534.]、抑制过敏性休克反应[Kuba-Miyara M等.Int Immunopharmacol.2012；12(4):675-681.]等。然而现有技术中尚无冲山茶苷在皮肤光损伤治疗领域的相关报道。
发明内容
[0004]本发明的目的是提供冲山茶苷在预防和/或修复皮肤光损伤中的应用，以解决上述现有技术存在的问题。冲山茶苷可有效修复紫外光损伤皮肤，具有广阔的市场应用前景。
[0005]为实现上述目的，本发明提供了如下方案：
[0006]本发明提供冲山茶苷在制备预防和/或修复皮肤光损伤产品中的应用，所述冲山茶苷的结构式如下所示：
[0007]
[0008]进一步地，所述冲山茶苷的有效浓度为0.05μg/mL-5μg/mL。
[0009]进一步地，所述皮肤光损伤为紫外光照射导致的皮肤光损伤。
[0010]进一步地，所述皮肤光损伤包括晒黑、晒伤、光老化、光毒性反应、光敏反应或皮肤肿瘤中的一种或多种。
[0011]本发明还提供一种预防和/或修复皮肤光损伤的外用制剂，所述预防和/或修复皮肤光损伤的外用制剂的有效成分为冲山茶苷。
[0012]进一步地，以质量百分比计，所述外用制剂中所述冲山茶苷的含量为0.1％-5％。
[0013]进一步地，所述预防和/或修复皮肤光损伤的外用制剂包括化妆品、医学美容产品或药品。
[0014]进一步地，所述化妆品包括原液、乳液、精华素、精华霜、爽肤水、调理水、面霜、面膜、隔离霜、眼霜、喷雾、防晒霜、粉底或身体乳。
[0015]进一步地，所述医学美容产品包括原液、敷料、冷敷贴、凝胶、海绵、膜、水光针、植入剂、乳、霜或膏。
[0016]本发明公开了以下技术效果：
[0017](1)本发明提供的冲山茶苷具有良好的清除自由基的作用，无细胞毒性，安全性好。
[0018](2)本发明提供的冲山茶苷及冲山茶苷提取物对紫外损伤的皮肤细胞具有显著的抑制活性氧的产生以及增强细胞活力的活性。
[0019](3)本发明提供的冲山茶苷软膏，可以改善紫外光照后皮肤的疼痛反应，减轻皮肤水肿现象以及红斑或焦痂的产生，其皮肤修复效果与现有市售的磺胺嘧啶银软膏相当。
[0020](4)本发明提供的冲山茶苷凝胶，可以改善紫外光照后皮肤的损伤状态、保持表皮层水分，诱导皮肤表皮细胞生长，抑制炎症症状，其皮肤修复效果与现有市售的海藻糖芦荟抑菌凝胶相当。
[0021](5)本发明提供的冲山茶苷水溶性好，易于添加和制备多种制剂，能规模化生产，可用于制备化妆品、医学美容产品或药品，帮助预防和/或修复光损伤皮肤。
附图说明
[0022]为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
[0023]图1为冲山茶苷体外清除自由基及细胞毒性评价；A：冲山茶苷对ABTS+自由基的清除测定；B：冲山茶苷对DPPH自由基的清除能力评价；C：冲山茶苷对HaCaT细胞活力影响的测定；
[0024]图2为紫外照射对HaCaT细胞增殖活力和ROS的测定；A：冲山茶苷及其提取物对细胞增殖的影响；B：冲山茶苷及其提取物对细胞中ROS抑制效果；
[0025]图3为冲山茶苷软膏对紫外光照射大鼠脚背皮肤损伤的评价；A：大鼠脚背皮肤损伤图片；B：小鼠足部疼痛阈值测定结果统计图；
[0026]图4为冲山茶苷凝胶对紫外光照射小鼠背部皮肤损伤的评价；A：小鼠背部损伤图片；B：小鼠背部皮肤损伤综合评分；
[0027]图5为冲山茶苷凝胶对紫外光照射小鼠背部皮肤H&E染色图(A)和染色评分统计图(B)；A中红色线段所示为增厚的皮肤表皮，黑色箭头所指为受损的角质层，白框中表示炎性因子的浸润；
[0028]图6为冲山茶苷凝胶对紫外光照射小鼠背部皮肤炎症因子的含量影响的统计图；A：IL-1β；B：IL-6。
具体实施方式
[0029]现详细说明本发明的多种示例性实施方式，该详细说明不应认为是对本发明的限制，而应理解为是对本发明的某些方面、特性和实施方案的更详细的描述。
[0030]应理解本发明中所述的术语仅仅是为描述特别的实施方式，并非用于限制本发明。另外，对于本发明中的数值范围，应理解为还具体公开了该范围的上限和下限之间的每个中间值。在任何陈述值或陈述范围内的中间值，以及任何其他陈述值或在所述范围内的中间值之间的每个较小的范围也包括在本发明内。这些较小范围的上限和下限可独立地包括或排除在范围内。
[0031]除非另有说明，否则本文使用的所有技术和科学术语具有本发明所述领域的常规技术人员通常理解的相同含义。虽然本发明仅描述了优选的方法和材料，但是在本发明的实施或测试中也可以使用与本文所述相似或等同的任何方法和材料。本说明书中提到的所有文献通过引用并入，用以公开和描述与所述文献相关的方法和/或材料。在与任何并入的文献冲突时，以本说明书的内容为准。
[0032]在不背离本发明的范围或精神的情况下，可对本发明说明书的具体实施方式做多种改进和变化，这对本领域技术人员而言是显而易见的。由本发明的说明书得到的其他实施方式对技术人员而言是显而易见得的。本发明说明书和实施例仅是示例性的。
[0033]关于本文中所使用的“包含”、“包括”、“具有”、“含有”等等，均为开放性的用语，即意指包含但不限于。
[0034]下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法，按照本领域内的文献所描述的技术或条件或者按照产品说明书进行。下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
[0035]冲山茶苷提取物的制备：本发明以山茶科植物防城港普通种金花茶(Camelliapetelotii(Merr.)Sealy)的叶子为原料，以水煎煮的方式提取得到冲山茶苷提取物。
[0036]冲山茶苷的制备：将冲山茶苷提取物通过大孔吸附树脂富集其中的冲山茶苷，再利用高效制备液相色谱对其进行精制，获得高纯度的(≥90％)冲山茶苷单体。本发明的具体研究如下：
[0037]实施例1冲山茶苷体外清除自由基活性的评价
[0038]1、ABTS+自由基清除率检测
[0039]ABTS(2,2'-联氮-双-3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)与K2S2O8反应可生成稳定的阳离子自由基ABTS+。该自由基呈绿色，在734nm处有最大吸收，自由基清除剂存在时则会使ABTS+自由基减少，据此可评估物质清除自由基的能力。
[0040]7.4mMABTS与2.6mM K2S2O8混匀，避光静置12h，即得ABTS储备液。取0.4mlABTS储备液，用PBS缓冲液稀释至在734nm处测定吸光度为0.7±0.02，得ABTS工作液。取0.2mL工作液与10μL供试品或PBS溶液混合，室温避光静置6min，使用多功能酶标仪在734nm处测定吸光度。
[0041]供试品为冲山茶苷溶液，浓度分别为50μg/mL、150μg/mL、300μg/mL、450μg/mL、600μg/mL，此外设置20μg/mLVc为阳性对照，PBS溶液为空白对照。
[0042]ABTS+自由基清除率(％)＝(A0-A)/(A0)×100％，其中A0是PBS对照溶液的吸光度，A是存在供试品的吸光度。
[0043]2、DPPH自由基清除活性检测
[0044]DPPH(1,1-二苯基-三硝基苯肼)测定法也是一种常用的测定物质抗氧化能力的体外测定方法。当体系中含有自由基清除剂时，可以结合或替代DPPH，使自由基DPPH数量减少，紫色变浅，在517nm处吸光度也减小，可用来评估物质的抗氧化能力。
[0045]首先称取DPPH适量，加95％乙醇超声溶解，在517nm下测定DPPH溶液使得吸光度在1.2-1.3之间。将供试品与DPPH溶液按照1:1混匀，并设置空白对照组(以95％乙醇替换供试品)在暗处孵育30min。使用多功能酶标仪在517nm处测定吸光度。
[0046]所述的供试品为冲山茶苷溶液，浓度分别为50μg/mL、150μg/mL、300μg/mL、450μg/mL、600μg/mL，此外设置20μg/mLVc为阳性对照。
[0047]DPPH自由基清除率(％)＝(1-A/A0)×100％，其中A是供试品存在下的吸光度，A0是对照的吸光度。
[0048]结果如图1中A和B所示，冲山茶苷在50至600μg/mL浓度下表现出良好的清除ABTS+和DPPH自由基的能力。
[0049]实施例2冲山茶苷对HaCaT细胞毒性的评价
[0050]待培养的HaCaT细胞(人永生化表皮角质细胞，购于武汉普诺赛生物技术有限公司)生长至80％密度时，消化后取100μL细胞悬液接种于96孔培养板中。细胞贴壁后将不同浓度的冲山茶苷(0.05μg/mL、0.5μg/mL、5μg/mL、10μg/mL、20μg/mL、40μg/mL、50μg/mL)加入到96孔板中，孵育24h。结束后在各个孔中加入10μL的CCK-8溶液(购自MedChemexpress生物科技公司)，37℃避光孵育40min，用酶标仪在450nm下测定各孔吸光度。
[0051]结果如图1中C所示，可见不同梯度的冲山茶苷处理后对HaCaT细胞活力均无任何影响，表明冲山茶苷无细胞毒性，安全性好。
[0052]实施例3冲山茶苷及冲山茶苷提取物对紫外照射HaCaT细胞增殖和ROS清除的影响
[0053]将HaCaT细胞悬液接种于96孔板，待细胞贴壁后给予不同浓度的冲山茶苷(0.05μg/mL、0.5μg/mL、5μg/mL)、冲山茶苷提取物(0.5μg/mL、5μg/mL、50μg/mL)以及阳性对照α-生育酚(5μg/mL)处理细胞8h。随后将细胞培养板置于紫外交联仪下进行紫外光损伤模型的构建，在750mJ/cm2条件下照射30min。照射结束后采用ROS检测试剂盒(购自北京索莱宝科技有限公司)对各组细胞中ROS水平进行测定。此外为了测定对细胞增殖的影响，在光损伤造模后，继续培养细胞8h，按照CCK-8试剂盒说明书检测冲山茶苷及其提取物对HaCaT细胞增殖的影响。
[0054]结果如图2所示，冲山茶苷及冲山茶苷提取物均对细胞起到了较好的保护作用，减少了紫外损伤所致的细胞损伤，增强了细胞增殖活性(图2中A)。相较于模型组，冲山茶苷及其提取物表现出浓度依赖性的降低细胞中ROS的水平，减少氧化应激反应，保护细胞免受损伤。其活性与α-生育酚相比保持一致(图2中B)。
[0055]实施例4冲山茶苷软膏对紫外光损伤大鼠脚背皮肤修复实验
[0056]1、冲山茶苷软膏的制备
[0057]单硬脂酸甘油酯1.2g和凡士林3g置于玻璃烧杯中，并以质量百分比计，按照软膏中冲山茶苷的含量为0.1％、0.5％、2.5％，将冲山茶苷与甘油3mL、水10mL混匀于另一玻璃烧杯中。两烧杯均置于水浴锅中80℃加热搅拌融化，随后混合两项并搅拌均匀，即得冲山茶苷低、中、高剂量软膏。相同制备方法，区别仅在于不加入冲山茶苷，制备得到的即为空白软膏基质。
[0058]2、紫外照射大鼠脚背皮肤损伤模型
[0059]取200g雄性SD大鼠(购于北京维通利华实验动物技术有限公司)，脱去大鼠右脚背毛发，暴露整个脚背皮肤，随机分为空白组、模型组、阳性对照组(磺胺嘧啶银软膏)、空白软膏基质组、以及冲山茶苷低、中、高剂量组。首先使用38500-PAM压力应用测量系统测量各大鼠第零天疼痛阈值作为对照，随后将大鼠固定，使用LED UVB灯置于大鼠右脚背上方垂直高处，预热5min后，给予辐照总量为500mJ/cm2，持续照射5min，照射后各组涂抹对应的软膏于损伤处，持续给药六天，每天测量疼痛阈值，并拍摄记录皮肤状态。
[0060]如图3中A所示，在紫外照射后，与空白组相比，模型组在第二天开始呈现明显的红肿、发热、红斑或焦痂等现象，在第五天逐渐消退；空白基质组与模型组现象保持一致，可见空白软膏基质对紫外损伤皮肤无任何修复效果；磺胺嘧啶银软膏组和冲山茶苷组大鼠脚背较模型组相比，肿胀明显较轻、红肿变弱。随后的疼痛阈值测定也反映出皮肤的损伤程度，如图3中B所示，模型组的疼痛反应显著，冲山茶苷组则明显的增强了脚背的疼痛阈值，可见冲山茶苷减轻了疼痛和皮肤损伤的发生。
[0061]实施例5冲山茶苷凝胶对紫外光损伤小鼠背部皮肤修复实验
[0062]1、冲山茶苷凝胶的制备
[0063]羟乙基纤维素1g，甘油5g，尼泊金甲酯0.05g，补水至50g，pH调至6-7，随后以质量百分比计，按照凝胶中冲山茶苷的含量为0.2％、1％、5％，将冲山茶苷混合其中并搅拌均匀，即得冲山茶苷低、中、高剂量凝胶。相同制备方法，区别仅在于不加入冲山茶苷，制备得到的即为空白凝胶基质。
[0064]2、紫外照射小鼠背部皮肤损伤模型
[0065]取20g雄性ICR小鼠(购于北京维通利华实验动物技术有限公司)，用脱毛膏对其背部进行脱毛，脱毛区域约为2×2cm。随机分为空白组、模型组、阳性对照组(海藻糖芦荟抑菌凝胶)、空白凝胶基质组、以及冲山茶苷低、中、高剂量组。使用LED UVB灯置于小鼠背部上方垂直高处，预热5min后，给予辐照总量为500mJ/cm2，持续照射5min，照射后各组涂抹对应的凝胶于损伤处。连续照射并给药三天，每天拍摄记录皮肤状态。为了观察小鼠在冲山茶苷治疗前后的皮肤组织学差异，对紫外照射损伤小鼠第三天的皮肤切片进行H&E染色，以观察细胞核和表皮的形态。并通过IL-1β及IL-6含量测定试剂盒(购自上海江莱生物科技有限公司)对损伤皮肤中炎症因子进行评估。
[0066]不同处理对紫外照射后小鼠背部皮肤的影响结果如图4，图4中A可见在紫外照射后，与空白组相比，模型组逐渐呈现皮肤干燥、红斑或焦痂、粗糙皱纹和表皮增厚等损伤状态，在第三天照射部位皮肤呈现大面积褐色焦痂、粗糙皱纹，晒伤现象；空白凝胶基质组与模型组现象保持一致，可见空白凝胶基质对紫外损伤皮肤无任何修复作用；海藻糖芦荟抑菌凝胶组和冲山茶苷组小鼠背部皮肤损伤较模型组相比，小鼠皮肤粗糙和皮肤晒伤的现象被显著改善。图4中B可见，与模型组相比，冲山茶苷组损伤皮肤面积的占比显著降低，其中，中、高剂量的冲山茶苷组与海藻糖芦荟抑菌凝胶组效果相当。可见，冲山茶苷可明显改善紫外照射后小鼠皮肤粗糙和皮肤晒伤的现象。
[0067]背部皮肤的H&E染色结果如图5所示，空白组小鼠皮肤表皮延伸至真皮，真皮层纤维连续，呈有序排列，细胞核形态良好，无炎性细胞，皮下脂肪及网状纤维形态良好。紫外照射后的模型组的小鼠未进行治疗，小鼠皮肤表皮全层受损，局部基底层水肿，局部结构缺失，真皮层血管扩张充血明显，网织层疏松水肿，观察到大量炎性细胞浸润。空白基质组与模型组现象一致，表明空白基质对皮肤损伤无修复作用。阳性对照海藻糖芦荟抑菌凝胶组中，表皮水肿消退，真皮结构完整，炎性细胞浸润显著减少。不同剂量的冲山茶苷治疗组对于紫外光损伤的皮肤修复效果良好，小鼠损伤皮肤恢复，与空白组健康小鼠的皮肤形态类似。可见冲山茶苷可通过增加表皮厚度，改善真皮层弹性纤维和胶原纤维排列等来发挥修复光损伤皮肤的作用。
[0068]IL-1β、IL-6含量测定结果如图6所示，可见冲山茶苷可以明显降低光损伤皮损组织中IL-1β、IL-6细胞因子水平，从而缓解炎症反应对皮肤的损伤、改善皮肤状态。
[0069]综上所述，本发明提供的冲山茶苷具有良好的清除自由基的活性，无细胞毒性且对皮肤细胞有增殖效果，对紫外损伤皮肤具有显著的修复作用，能够减缓损伤皮肤中的红肿、疼痛、红斑或焦痂、粗糙皱纹、皮肤老化等现象。
[0070]以上所述的实施例仅是对本发明的优选方式进行描述，并非对本发明的范围进行限定，在不脱离本发明设计精神的前提下，本领域普通技术人员对本发明的技术方案做出的各种变形和改进，均应落入本发明权利要求书确定的保护范围内。